Полная версия

Главная arrow География arrow БИОХИМИЯ

  • Увеличить шрифт
  • Уменьшить шрифт


<<   СОДЕРЖАНИЕ ПОСМОТРЕТЬ ОРИГИНАЛ   >>

Спектроскопические методы.

Спектроскопическими называют методы аналитического контроля и обнаружения различных веществ, в основе которых лежат их молекулярно-физические свойства. Схема электромагнитного спектра, используемая для исследований в области биохимии, приведена ниже.

Спектрофотометрия (стандартная абсорбционная спектроскопия) основана на способности веществ поглощать свет в видимой и ультрафиолетовой части спектра электромагнитного излучения. Вещества, поглощающие свет, называют хромофорами. Способность вещества поглощать свет той или иной длины волны зависит от его химической структуры и окружения. Поэтому спектры поглощения веществ индивидуальны. При пропускании монохроматического света интенсивности /0 через слой раствора вещества свет частично поглощается и интенсивность выходящего света / падает. Отрицательный логарифм отношения 7//0 называют поглощением D или оптической плотностью.

Поглощение света (<абсорбция) подчиняется закону Ламберта- Бугера-Бера: поглощение (D) света веществом данной длины волны пропорционально концентрации вещества в растворе (с) и толщине слоя раствора (/):

Коэффициент пропорциональности г называется коэффициентом экстинкции, который численно равен поглощению на данной длине волны раствора данного вещества с концентрацией 1 моль/л при / = 1.

Измерение поглощения осуществляют с помощью спектрофотометра. Все спектрофотометры (рис. 3.10), независимо от типа, состоят из источника света, монохроматора (для выделения определенной длины волны), измерительной камеры (куда помещается образец или кювета с исследуемым образцом для жидких и газообразных веществ), детектора света (фотоэлемента) и прибора для регистрации спектра. Для получения спектра поглощения исследуемого образца регистрируют поглощение на различных длинах волн.

Принципиальная схема спектрофотометра

Рис. 3.10. Принципиальная схема спектрофотометра

На рис. 3.11 и 3.12 приведены примеры спектров поглощения различных биологических объектов, которые можно использовать для идентификации вещества.

Спектры поглощения различных биообъектов

Рис. 3.11. Спектры поглощения различных биообъектов:

а - флавинмононуклсотида, б - фикоцианина; Х|,..., А* - длины волн максимумов поглощения

Спектр поглощения хромофора определяется в основном химической структурой молекулы, однако максимумы поглощения могут смещаться в зависимости от условий среды.

Спектры поглощения тирозина при pH 6 (7) и pH 13 (2)

Рис. 3.12. Спектры поглощения тирозина при pH 6 (7) и pH 13 (2)

Из приведенных спектров видна взаимосвязь между химической структурой молекулы и ее спектрами поглощения: при диссоциации ОН-группы коэффициент экстинкции (е) и длина волны максимума поглощения (А™**) фенольного остатка возрастают: при pH 6 Хтах = 274 нм, а при pH 13 Х™,, = 295 нм.

 
<<   СОДЕРЖАНИЕ ПОСМОТРЕТЬ ОРИГИНАЛ   >>