Полная версия

Главная arrow География arrow БИОТЕХНОЛОГИЯ РАСТЕНИЙ

  • Увеличить шрифт
  • Уменьшить шрифт


<<   СОДЕРЖАНИЕ ПОСМОТРЕТЬ ОРИГИНАЛ   >>

Лабораторная работа № 1. Получение каллусной ткани из листьев табака

Каллус — это группа клеток, возникающая при травмах и защищающая место поранения (раневая паренхима). В ней накапливаются питательные вещества для регенерации анатомических структур или утраченного органа. На питательных средах с большим содержанием ауксинов (2,4-Д) клетки экспланта дедифференцируются. Клетки утрачивают прежние функции и морфологию. Особенности дедифференциации клеток экспланта зависят от генетики экспланта. Причем, чем менее дифференцирована клетка, тем легче получить каллус. Дедифференциация специализированных клеток начинается с обогащения их элементами цитоплазмы: микротрубочками, мембранами ЭПС и комплекса Гольджи, рибосомами, исчезают хлоро- и хромопласты, продукты их деятельности; может образоваться много ядер или увеличиться число хромосом; укрупняются вакуоли. Каллус, выращиваемый поверхностным способом, представляет собой аморфную массу тонкостенных паренхимных клеток, не имеющую строго определенную структуру. Клетки каллуса либо бесцветны, либо имеют желтоватый опенок. В зависимости от происхождения и условий культивирования различают каллусы: рыхлые, с сильно оводненными, легко отделяющимися друг от друга клетками; средней плотности, с зонами меристе- матической активности; плотные, с зонами редуцированного камбия и сосудов.

В биотехнологии чаще всего используют те виды растений, которые и в обычных условиях легко укореняются, регенерируют, образуют каллус. Клетки табака легко дедифференцируются и переходят к делению, образуя быстрорастущую каллусную ткань. Поэтому большинство методов получения и культивирования каллуса разработано для табака. Каллусы можно получить практически из любой части растения. Для культивирования каллусов из листьев табака используют среду Мурасиге — Скуга (МС) с добавлением ауксинов (2,4-Д).

Цель работы: освоить метод приготовления питательной среды для получения каллусной культуры табака.

Оборудование и материалы: 6% раствор хлорамина, колбы со стерильной дистиллированной водой, чашки Петри со стерильной питательной средой МС для индукций каллусогенеза.

Объект исследования: растения табака.

Таблица 1

Приготовление маточных растворов для среды Мурасиге — Скуга (МС)

п.п.

Компонент среды

Количество вещества

Маточный раствор макросолей (г на 1 л маточного раствора)

1

KN03

38

2

nh4no3

33

3

КН2Р04

3,4

4

MgS04 • 7Н20

7,4.

или MgS04 безводный

3,6

5

СаС12 • 2Н20

8,8

или СаС12 безводный

6,65

Маточный раствор микросолей (мг на 100 мл маточного раствора)

6

Na2Mo04 • 2Н20

25

7

CuS04 • 5Н20

2,5

8

Н3В03

620

9

MnS04 ? 5Н20

2410

или MnS04 • 4Н20

2230

10

ZnS04 • 7Н20

860

11

KJ

83

12

СоС12 • 6Н20

2,5

13

FeS04

557

Na2 ЭДТА

745

Среда Мурасиге — Скуга (МС) для клеточных и тканевых культур

Таблица 2

Компоненты питательной среды

Маточный раствор макросолей

50 мл/л

Маточный раствор микросолей

1 мл/л

Fe-хеллат

5 мл/л

СаС12

50 мл/л

Тиамин-НС1

0,1 мг/л

Пиридоксин-НС1

0,5 мг/л

Никотиновая кислота

0,5 мг/л

Мезоинозит

100 мг/л

Глицин

2 мг/л

Сахароза

30 г/л

pH 5,6—5,8

Ход работы: приготовить среды МС с добавлением 1.0мг/л2,4—Д + + 0,2 мг/л БАП и 1.0 мг/л ИУК + 0,2 мг/л БАП. Листья табака поместить в дезинфицирующий раствор на 5 мин, затем промыть стерильной дистиллированной водой 3 раза. Стерильным скальпелем вырезать сегменты у основания листа ближе к центральной жилке длиною

1,5—2 см, шириной 1 см. Для лучшего каллусообразования делают насечки по всей поверхности сегмента. Поместить экспланты на питательные среды (перед каждой манипуляцией инструменты обрабатывать спиртом и обжигать на пламени спиртовки). Чашки Петри с эксплантами перенести в термостат для индукций каллусогенеза при температуре 25°С.

Задание: результаты опыта рассмотреть через 2—4 недели, зарисовать, сравнить каллус, полученный на среде с ИУК и с 2,4-Д. Сделать выводы.

 
<<   СОДЕРЖАНИЕ ПОСМОТРЕТЬ ОРИГИНАЛ   >>