Полная версия

Главная arrow География arrow БИОТЕХНОЛОГИЯ РАСТЕНИЙ

  • Увеличить шрифт
  • Уменьшить шрифт


<<   СОДЕРЖАНИЕ ПОСМОТРЕТЬ ОРИГИНАЛ   >>

Лабораторная работа № 4. Субкультивирование кактусов

В цикле выращивания каллусные клетки после ряда делений проходят обычный онтогенез: растут растяжением, дифференцируются и деградируют. Рост каллуса можно отразить S-образной кривой роста. Ростовой цикл начинается с посадки экспланта на среду (начало культивирования), а завершается в момент прекращения митозов (стационарная фаза). В лаг-фазе (латентной фазе) клетки не делятся, не увеличиваются в размере, имеют низкую метаболическую активность. В экспоненциальной фазе (фазе логарифмического роста) клетки активно делятся митозом. В ранней экспоненте увеличивается количество митохондрий (синтезируется АТФ), рибосом, всех видов РНК, синтезируются белки, активизируется метаболизм, интенсивно поглощается кислород. Поздняя экспонента, характеризуется снижением удельной скорости роста, замедлением клеточного деления, увеличением среднего размера клеток за счет растяжения. В стационарной фазе (фаза плато) размер клеток продолжает увеличиваться, а их деление прекращается. В поздней стационарной фазе (фаза деградации) за счет истощения среды клетки стареют и отмирают. Продолжительность ростового цикла каллусных клеток 21—28 дней. В процессе культивирования каллус пассируют (пересаживают на свежую питательную среду) каждые 4—6 недель в зависимости от интенсивности роста. Масса транспланта (фрагмента ткани, который пассируют на свежую питательную среду) составляет 60—100 мг на 20—40 мл среды.

Цель работы: исследовать характер роста каллуса картофеля.

Оборудование и материалы: пробирки с питательной средой для культивирования каллусов, пинцеты, препаровальные иглы, флакон с 96% спиртом, ламинар-бокс, спиртовка.

Объект исследования: каллусная культура клеток картофеля.

Ход работы: в асептических условиях извлечь каллусы из пробирок и поместить на стерильную поверхность. Стерильной препарироваль- ной иглой выделить зоны меристематической активности (белые мелкие клетки). Транспланты величиной 2—3 мм поместить на поверхность питательной среды (среда МС + 30 г/л сахароза + 1 мг/л НУК + + 0.8 мг/л БАП). Культивируют в светлой культуральной комнате при 25°С или в термостате.

Обычно цикл выращивания составляет 4 недели. За это время для построения кривой роста каллус взвешивают 4 раза, через каждые 7 дней.

Задание: по результатам взвешиваний через 1, 2, 3 и 4 недели построить кривую роста каллуса. Кроме снятия ростовых показателей отмечать цвет и консистенцию каллусной ткани. Результаты культивирования зарисовать через 2—4 недели. Рассчитать интенсивность роста каллусной ткани в % по формуле

где ИР — интенсивность роста; п^ — масса каллусной ткани в начале пассажа; ш2 — масса каллусной ткани в конце пассажа.

 
<<   СОДЕРЖАНИЕ ПОСМОТРЕТЬ ОРИГИНАЛ   >>