Практические примеры

I. Гидролиз пептидов проводят для исследования аминокислотного состава, получения свободных аминокислот или в других целях. При полном гидролизе, его также называют тотальным, разрушаются все пептидные связи. Для ускорения процесса его проводят в присутствии кислоты или щелочи. В результате смесь содержит определенные производные аминокислот. Чтобы определить, какие производные аминокислот образуются, необходимо выполнить следующие действия.

1. Написать схему гидролиза пептида. Например, при гидролизе трипеп- тида образуются три аминокислоты:

2. Представить аминокислоты в ионизированной форме, поскольку процесс проходит в водной среде:

3. Учесть реакцию среды, в которой протекал гидролиз. В кислой среде, при добавлении Н диссоциация СООН-групп подавлена, поэтому аминокислоты присутствуют в форме катионов:

При проведении гидролиза в присутствии щелочи прекращается ионизация NH2-rpyini и аминокислоты находятся в виде анионов:

Эта информация полезна для дальнейшего разделения аминокислот, например, методом электрофореза.

II. Разделение аминокислот методом электрофореза — широко распространенный способ их идентификации. Чтобы применить его на практике, следует правильно подобрать буферную смесь для разделения. Значение pH буферной смеси должно быть таким, чтобы отдельные аминокислоты или ряд аминокислот находились в ионизированной форме. Для этого необходимо использовать справочные данные о значениях отрицательных десятичных логарифмов констант диссоциации для NH2- и СООН-групп — рК1? рК7 и pK:i (см. приложение 1) и рассчитать значение pi, при котором аминокислота не имеет заряда. Например, для нейтральной аминокислоты Гли значение ИЭТ будет равно

Если использовать буферную смесь со значением, близким к pH = 5,97, то Гли во время электрофореза останется на старте и не будет перемещаться ни к катоду, ни к аноду.

В более кислой среде, например при pH = 2,5, диссоциация СООН-групп подавляется и аминокислота приобретает заряд «+», следовательно, начнется ее движение в сторону отрицательно заряженного электрода.

В более щелочной, чем значение pi, среде, например при pH = 10,5 останутся ионизированными только СООН-группы, поэтому Гли будет перемещаться в сторону положительно заряженного электрода.

 
Посмотреть оригинал
< Пред   СОДЕРЖАНИЕ   ОРИГИНАЛ     След >