Значение дедифференцировки тканей

Дедифференцировка есть утрата характерных черт исходной ткани. Дифференцированные клетки конкретных тканей, органов растения не обладают способностью к делению.

Дедифференцированные клетки образуют первичный каллус. Каллусная ткань возникает при неорганизованном делении дедифференцированных клеток. Она образуется на поврежденных растениях и в стерильных условиях на эксплантах — фрагментах ткани или органа.

Дедифференцировка и индукция каллусогенеза возникают под действием раковых гормонов (травматиновая кислота) при повреждении тканей. Вторым обязательным условием является наличие гормонов роста — ауксинов и цитокининов.

Ауксины вызывают дедифференцировку клеток, готовят ее к делению. Цитокинины инициируют деление.

Примерами ауксинов являются: 2,4-D (2,4-дихлорфенокси- уксусная кислота), ИУК (индолилуксусная кислота).

Пример цитокинина — кинетин 6-БАП (6-бензиламинопу- рин).

При дедифференциации в клетках разрушаются клеточные органеллы, в частности хлоропласты, разрушается аппарат Гольджи и происходят некоторые другие изменения. Через несколько часов в условиях in vitro начинается новый синтез белка. Но когда израсходуются остаточные гормоны, то, при наличии в среде гормонов роста начинается каллусогенез.

Типы культур клеток или тканей

На агаризованной питательной среде при поверхностном культивировании образуется каллусная ткань. Она не имеет структуры, но может иметь разную плотность (рис. 2.12).

Клеточные суспензии образуются как при глубинном культивировании, так и непосредственно из экспланта. Разрыхлить плотную ткань можно, исключив ионы Са2+ из питательной среды либо введением ферментов.

Типы каллусных культур

Рис. 2.12. Типы каллусных культур

Получить суспензию из плотной ткани можно при автоматическом перемешивании. Клеточные суспензии используют при введении чужеродных ДНК и при синтезе вторичных метаболитов.

Культура одиночной клетки дает клон — потомство, которое используется в генетических исследованиях.

Для культивирования одиночной клетки нужно в питательной среде создать достаточную концентрацию кондиционирующего (К) фактора, выделяемого делящимися клетками. Для этого используют следующие приемы.

  • 1. Метод ткани-няньки — К. фактор выделяется находящимися рядом с одиночной клеткой кусочком ткани-няньки.
  • 2. Метод «кормящего слоя» — К. фактор выделяют клетки суспензионной культуры того же растения.
  • 3. Кондиционирование среды — добавление среды отфильтрованной от делящихся клеток.
  • 4. Метод культивирования одиночной клетки в микрокапле (20 мкл) богатой питательной среды.
 
Посмотреть оригинал
< Пред   СОДЕРЖАНИЕ   ОРИГИНАЛ     След >