Полная версия

Главная arrow Агропромышленность arrow Общая фитопатология

  • Увеличить шрифт
  • Уменьшить шрифт


<<   СОДЕРЖАНИЕ   >>

Антитела

Для любого иммунологического теста необходимы специфичные антитела. Антитела синтезируются плазматическими клетками организма животных (плазмацитами), в которые превращается часть В-лимфоцитов в ответ на присутствие антигенов. Для каждого антигена формируются соответствующие ему специализировавшиеся плазматические клетки, вырабатывающие специфичные для этого антигена антитела. Антитела распознают антигены, связываясь с определенным эпитопом — характерным фрагментом поверхности или линейной аминокислотной цепи антигена. Основным свойством специфических антител является их аффинность, которая характеризует прочность связывания антитела с антигеном.

В иммунодиагностике используют поли- и моноклональные антитела. Их получают разными способами, что накладывает отпечаток и на их свойства.

Поликлональные антитела получают из сыворотки крови иммунизированного животного, обычно кролика, барана или козы. Поликлональные антитела образуются в результате функционирования многочисленных клеточных клонов и, следовательно, гетерогеины как по своей природе, так и по специфичности к определяемому антигену.

Поликлональные антитела широко используют для диагностики разных фитопатогеииых организмов: вирусов, бактерий и грибов. Получение поликлональных антител — относительно простая процедура (по сравнению с получением моноклональных антител). В ряде случаев при диагностировании патогенов из природной популяции гетерогенность поликлональных антител является преимуществом, так как позволяет идентифицировать объекты, отличающиеся вариабельностью антигенной конфигурации. Однако присутствие среди поликлональных антител фракции с низкой специфичностью может привести к взаимодействию с нецелевыми антигенами и, как следствие, к ложноположительным результатам.

Моноклональные антитела продуцируются одним клоном плазмоцитов (т.е. происходящими из одной клетки-предшественницы) и отличаются очень высокой специфичностью к антигенному эпитопу. Они идентичны по своему строению, имеют одинаковые активные центры, обладают одной и той же специфичностью, взаимодействуют с одним и тем же эпитопом антигена с одинаковой аффинностью.

В природных условиях макроорганизма получить моноклональные антитела практически невозможно. Дело в том, что па одну и ту же антигенную детерминанту одновременно реагируют до 100 различных клонов В-лимфоцитов, незначительно различающихся антигенной специфичностью рецепторов и, естественно, аффинностью. Поэтому в результате иммунизации даже монодетерминантным антигеном мы всегда получаем поликлональные антитела.

Для получения моноклональных антител в настоящее время используют так называемую гибридомную технологию [1]. Гибридомы (гибридные клетки) получают путем слияния нормальных плазмацитов иммунизированных мышей, продуцирующих антитела, с опухолевыми (раковыми) клетками — миелобластами, способными к неограниченному во времени росту и делению. С помощью последовательных разведений и пересевов получают одиночные гибридные клетки и их клоны, способные неограниченно долго размножаться в условиях in vitro и продуцировать антитела с нужной специфичностью. Культивируя гибридомы, можно получать довольно большие объемы моноклональных антител. Очень удобно то, что гибридные клетки можно консервировать и длительно хранить в жидком азоте. После размораживания клетки можно сразу использовать для наработки антител, их свойства при хранении не изменяются. Это позволяет создавать банки гибридных клеток и по мере необходимости использовать их для производства нужных антител.

На практике использование моноклональных антител при диагностике может привести к получению ложноотрицательных результатов, так как из-за узкой специфичности они могут не распознать некоторые природные штаммы идентифицируемых фитопатогенов.

Антигенами могут быть самые разные структуры и метаболиты фитопатогенных микроорганизмов. Для получения поликлональных антител используют как вирусы, целые клетки и клеточные стенки фитопатогенов, так и экстрацеллюлярные секреты и экстракты грибов и бактерий. Более специфичные антитела получают при введении в животного-продуцента хорошо очищенных антигенов. Для получения моноклональных антител необходимо использовать только высокоочищенные антигены.

  • [1] Гибридомная технология, разработанная Г. Кёлером и С. Мильштейном, в 1984 г. была удостоена Нобелевской премии по физиологии и медицине.
 
<<   СОДЕРЖАНИЕ   >>